Fluo-4 的膜渗透 AM 酯形式，可通过孵育进入细胞。由于 AM 酯的水溶性相对较低，温和的去污剂Pluronic® F-127（目录号 59004）通常用作分散剂以促进细胞负载。Fluo-4 AM 酯本身不与 Ca 2+结合，但一旦进入细胞内，它很容易被内源性酯酶水解成 Fluo-4。Fluo-4 AM 酯通常用于在高通量药物筛选中测量细胞内钙。

Fluo-4 是 Fluo-3 的类似物，其中两个氯取代基被氟取代，这导致 488 nm 处的荧光激发增加，从而产生更高的荧光信号。Fluo-4 在 494 nm 处具有最大吸收，因此可被氩离子激光激发。Fluo-4 在没有 Ca 2+存在的情况下基本上是非荧光的，但在 Ca 2+结合时荧光增加至少 100 倍。此外，由于 Fluo-4 比 fura-2 和 indo-1 更弱地结合 Ca 2+（更高的 Kd），因此它对于测量Ca 2+尖峰期间的高瞬时 Ca 2+浓度更有用。

Fluo-4 AM 酯可用于通过荧光显微镜、流式细胞术或荧光酶标仪检测细胞内游离钙。

基于 BAPTA 的离子指示剂（如 Fluo-4）已被EDC/EDAC（目录号 59002）原位固定。指示染料的固定可用于下游免疫荧光和 IHC 研究 ( Cell Calcium 1997, 21(3), 175 )。

由于指示剂不与细胞成分共价结合，因此它可以通过有机阴离子转运蛋白主动从细胞中流出。流出速率随温度增加，并且可能因细胞类型而异，导致保留时间从几分钟到几小时不等。在细胞中使用指示剂的实验通常在加载后一到两个小时内进行，但如果需要，可以重新加载具有指示剂的细胞。有机阴离子转运蛋白抑制剂丙磺舒 (#50027)可用于减缓指示剂从细胞中流出的速度。

我们还提供 Fluo-4 作为膜不可渗透的五钾盐版本，目录号 50019。

• 可溶于DMSO的橙红色固体

• -20°C 储存并避光，尤其是在溶液中时

• λ Ex /λ Em（含 Ca 2+）：494/506 nm（水解后）

•  缓冲液中 Ca 2+的K d：~335 nM（水解后）

• C 51 H 50 F 2 N 2 O 23

• 分子量：1096.95

• [273221-67-3]

Pluronic 是巴斯夫的注册商标。