AccuBlue® NextGen dsDNA Quantitation Solution
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AccuBlue® NextGen dsDNA 定量分析是用于超低量 DNA 的最灵敏和准确的 DNA 定量方法，线性范围为 ~1 – 3,000 pg（取决于仪器能力）。该测定专为与荧光酶标仪配合使用而设计。该解决方案不附带 DNA 标准品；请参阅 AccuBlue® NextGen 试剂盒 ( 31060 )，其中包含小牛胸腺 DNA 标准品。
特征
市场上最灵敏的检测方法：在灵敏度和准确度方面优于 PicoGreen® 等竞争对手
线性范围：1-3000 pg dsDNA（取决于酶标仪能力）
绿色荧光染料与蓝色 LED 激发源完美匹配
工作溶液在 4C 下可稳定长达 6 个月，更加方便
套件组件
AccuBlue® NextGen 染料，400X
AccuBlue® NextGen 增强剂，100X
DNA 定量缓冲液，20X*
*注意：为了绿色环保并节省包装和运输费用，我们已将 1X 缓冲液更改为 20X 缓冲液。
AccuBlue® NextGen 在 96 孔板读数器测定中检测限低至 1 pg DNA（见表 1），在灵敏度和准确性方面优于 PicoGreen® 等竞争对手。AccuBlue® NextGen 专为需要量化极度稀释或珍贵 DNA 的科学家而设计，非常适合用于为下一代测序 (NGS) 和数字 PCR 等应用准备样品。
由于 AccuBlue® NextGen 检测非常灵敏，因此结果会因许多因素而异，例如酶标仪（见下表）、检测体积和移液器准确性。
酶标仪检测限
| 读板机 | 测定形式（测定体积） | 检测到的最低 DNA |
|---|---|---|
| BMG 克拉里奥之星 | 96 孔（200 微升） | 1 皮克 |
| BMG 克拉里奥之星 | 384 孔（50 微升） | 0.6皮克 |
| Biotek Synergy H1m | 96 孔（200 微升） | 5 皮克 |
| SpectraMax 双子座 XS | 96 孔（200 微升） | 5 皮克 |
| SpectraMax i3 | 384 孔（50 微升） | 1.25 皮克 |
基于荧光的 dsDNA 定量
AccuBlue®、AccuClear® 和 AccuGreen™ dsDNA 定量分析允许在各种浓度和各种荧光检测仪器中对纯化的 dsDNA 样品进行精确定量。与基于吸光度的核酸定量不同，荧光 DNA 结合染料对双链 DNA 具有高度敏感性和选择性，并且在存在污染 RNA 和其他常见污染物（包括游离核苷酸、蛋白质、去污剂和盐）的情况下提供更准确的 DNA 浓度。
Biotium 为不同的仪器和样品浓度范围提供 dsDNA 定量试剂盒和解决方案。请参阅下表并访问 DNA 和 RNA 定量技术页面， 了解我们全系列 dsDNA 和 RNA 定量试剂盒的详细信息。
所有 DNA 和 RNA 定量试剂盒
| 成套工具 | DNA 或RNA | 检测范围 （测定中）* | 染料 Ex/Em (nm) | 推荐仪器 | 特征 |
|---|---|---|---|---|---|
| AccuGreen™ 高灵敏度 DNA | 脱氧核糖核酸 | 0.1-100 纳克 | 502/523 | Qubit® 荧光计 | 与 Thermo Fisher 的 Qubit® dsDNA HS 分析比较 |
| AccuGreen™ 广谱 DNA | 脱氧核糖核酸 | 2-1000 纳克 | 500/530 | Qubit® 荧光计 | 与 Thermo Fisher 的 Qubit® dsDNA BR 测定法比较 无毒、无致突变性 DNA 定量染料 |
| AccuBlue® NextGen DNA | 脱氧核糖核酸 | 1-3000 皮克** | 468/507 | 荧光酶标仪 | 最灵敏的检测方法可用于定量珍贵或稀释样品 最适合敏感应用，如 NGS 或数字 PCR |
| AccuClear® 超高灵敏度 DNA | 脱氧核糖核酸 | 0.03-250 纳克 | 468/507 | 荧光酶标仪 | 具有高灵敏度和宽线性范围的多功能套件 |
| AccuBlue® 高灵敏度 DNA | 脱氧核糖核酸 | 0.2-100 纳克 | 485/530 | 荧光酶标仪 | 无毒和无致突变性 DNA 定量染料 |
| AccuBlue® 广谱 DNA | 脱氧核糖核酸 | 2-2000 纳克 | 350/460 | 荧光酶标仪 | 具有蓝色荧光的宽线性范围 |
| AccuBlue® 宽范围 RNA | 核糖核酸 | 5-1000 纳克 | 650/670 | 荧光酶标仪 或 Qubit® 荧光计 | 线性范围最宽的可用 RNA 定量试剂盒 卓越的准确性、灵敏度和高 RNA 选择性 |
* 标准测定体积为 200 uL
** AccuBlue® NextGen 检测限在 1 pg 至 5 pg 范围内，具体取决于仪器灵敏度
AccuBlue 和 AccuClear 是 Biotium, Inc. 的注册商标。AccuBlue、AccuClear 和 AccuGreen 技术已获得美国和国际专利。Qubit 和 PicoGreen 是 Thermo Fisher Scientific 的注册商标。
参考
1. Analytical Biochemistry (2016) 10 Oct 15 pp74-79 doi:10.1016/j.ab.2016.07.022
2. J Assist Reprod Genet (2018) 35, 1497-1501 doi:10.1007/s10815-018-1223-4
我们的大多数产品在室温下可稳定保存数日，因此产品很可能仍能正常工作。为了安全起见，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前，先进行小规模的阳性对照实验，以确认该产品仍然适用于您的应用。
我们知道的一个例外是 GelGreen™，它比我们大多数其他荧光染料对光照更敏感。如果 GelGreen™ 长时间（数天至数周）暴露在环境光下，其颜色将从深橙色变为砖红色。如果发生这种情况，GelGreen 将不再适用于凝胶染色。
请注意，AccuBlue® NextGen 的最佳激发和发射最大值为 468/507 nm，这与其他 AccuBlue® 染料不同。可能需要调整荧光板阅读器的增益设置以获得最佳信号背景。
生物科学试剂盒
产品信息表上列出了自收到生物科学试剂盒之日起保证的保质期。一些套件在套件盒标签上印有有效期，这是从产品从我们工厂发货之日算起的保证保质期。套件的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧试剂盒，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该试剂盒仍适用于您的应用。
抗体和其他偶联物
产品信息表上列出了抗体和偶联物自收货之日起的保证保质期。抗体和其他结合物的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧偶联物，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该产品仍适用于您的应用。
对于冻干抗体，我们建议用甘油和抗菌防腐剂（如叠氮化钠）重构抗体以获得最长的保质期（请注意，叠氮化钠与 HRP 偶联物不相容）。
化学品、染料和凝胶染色剂
Biotium 保证化学品、染料和凝胶染色剂在您收到产品之日起至少一年内保持稳定。然而，只要按照建议储存，这些产品中的大多数在多年内都非常稳定。存储条件可在产品信息表或产品安全和数据表、材料安全数据表以及产品标签上找到。荧光化合物应避光以便长期储存。
如果您希望使用已储存超过一年的 Biotium 化合物，我们建议您进行小规模阳性对照实验，以确认该化合物在处理大量样品或珍贵样品之前仍适用于您的应用样品。
基于生产日期的有效期 (DOM)
如果您的机构要求您记录基于试剂生产日期的有效期，请联系 techsupport@biotium.com 寻求帮助。
有特殊稳定性考虑的化工产品：
酯类
酯类化合物包括：
• 琥珀酰亚胺酯（SE，也称为 NHS 酯），例如我们的胺反应性染料
• 乙酰氧基甲基酯（AM 酯），例如我们的膜渗透性离子指示剂染料
• 二乙酸酯改性染料，例如 ViaFluor ™ 405、CFDA 和 CFDA-SE 细胞活力/细胞增殖染料
只要避光和防潮，酯类染料在固体形式下是稳定的。酯在水溶液中不稳定。应在无水 DMSO中制备浓缩储备液（参见 Biotium 目录号90082）。无水 DMSO 中的储备液可在 -20°C 下干燥保存一个月或更长时间。酯类应在使用前立即用水溶液稀释。琥珀酰亚胺酯 (SE) 应溶解在不含会与 SE 官能团反应的含胺化合物（如 Tris、甘氨酸或蛋白质）的溶液中。AM 酯和二乙酸化合物应溶解在不含血清的溶液中，因为血清可能含有会水解该化合物的酯酶。
关于 CF® 染料琥珀酰亚胺酯稳定性的说明
琥珀酰亚胺酯 (SE) 通常容易水解，从而导致标记效率降低。许多用于生命科学研究的市售荧光染料都是高度磺化的染料，这使得它们特别容易吸湿，从而加剧了水解问题。此外，对于几种市售的 SE 活性染料，SE 基团衍生自芳香族羧酸，而 Biotium 的所有 CF® 染料中的 SE 基团均由脂肪族羧酸制备。这种结构差异降低了 CF® Dye SE 反应基团对水解的敏感性，从而产生相对稳定的活性染料，与其他荧光染料的其他 SE 衍生物相比，标记效率始终更高。
马来酰亚胺、MTS 和硫代硫酸盐染料
与琥珀酰亚胺酯染料一样，这些染料也容易水解，尽管水解程度通常要低得多。因此，对于长期储存，建议使用无水 DMSO 制备储备液。
其他活性染料
胺类、氨氧基（也称为甲醛）、酰肼、叠氮化物、炔烃、BCN 和酪胺类活性染料，以及染料游离酸，在-20°C 下储存 6-12 年时通常在水溶液中稳定几个月或更长时间，只要不存在可能与染料的官能团发生反应的化合物。有关特定活性染料的更多信息，请参阅产品信息表。
腔肠素和 D-荧光素
按照建议储存时，腔肠素以固体形式稳定；它们在水溶液中不稳定。应在乙醇或甲醇中制备浓缩腔肠素储备液（通常为 1-100 mg/mL）；不要使用 DMSO 或 DMF 溶解腔肠素，因为这些溶剂会氧化化合物。腔肠素的乙醇或甲醇库存可在 -20°C 或以下储存六个月或更长时间；酒精储备在储存过程中可能会蒸发，因此请使用密封的螺旋盖小瓶并用封口膜包裹小瓶以进行长期储存。丙二醇也可用作溶剂以减少蒸发。如果溶剂蒸发，腔肠素仍会存在于小瓶中，因此在储存前记下小瓶中的体积，以便您可以根据需要调整溶剂体积以校正蒸发。使用前立即在水性缓冲液中制备工作溶液。腔肠素在水溶液中最多可稳定 5 小时。
Aquaphile™ 腔肠素是腔肠素的水溶性制剂。当按照建议储存时，它们以固体形式稳定。Aquaphile™ 腔肠素应在使用前立即溶解在水溶液中。它们在水溶液中最多可稳定 5 小时。
请注意，腔肠素主要是黄色固体，但可能含有深红色或棕色斑点。这不会影响产品稳定性或性能。如果您的腔肠素呈均匀的棕色，则说明它已被氧化，需要更换。
D-荧光素在固体形式下是稳定的，并且在按照建议储存时作为浓缩储备液；它在水溶液中的稀释工作浓度下不稳定。在水中制备浓缩的 D-荧光素储备溶液（通常为 1-100 mg/mL），并在 -20°C 或更低温度下分装储存六个月或更长时间。使用前立即准备工作解决方案。