Coelenterazine

腔肠素及其类似物是异 equorin 和 Renilla 荧光素酶的发光酶底物。

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Coelenterazine 及其类似物是 apoaequorin 和Renilla荧光素酶的发光酶底物。Apoaequorin 用作钙指示剂，而Renilla荧光素酶通常用作转录调节的报告基因。腔肠素与脱辅基水母蛋白结合形成水母蛋白，后者在与钙结合后发光。水母发光蛋白可用于测量从 ~0.1 uM 到 >100 uM 的宽浓度范围的钙。海肾荧光素酶已被广泛用作报告蛋白和生物发光共振能量转移 (BRET) 中的生物发光供体，以研究蛋白质-蛋白质相互作用。腔肠素的其他用途包括化学发光检测细胞或组织中的超氧阴离子和过氧亚硝酸盐。

无法决定使用哪种腔肠素类似物？试试我们的腔肠素取样器套件（目录号 10123）。该试剂盒包括 9 种腔肠素类似物中的每一种 25 ug，包括 native、cp、f、fcp、h、hcp、i、ip 和 n。

腔肠素产品

产品	目录编号	兆瓦	格式
腔肠素取样器套件	10123	---	九种腔肠素类似物各 25 微克：原生、cp、f、fcp、h、hcp、i、ip 和 n
Aquaphile™ 腔肠素（天然）	10126	423.5	黄色固体溶于水或PBS缓冲液
Aquaphile™ 腔肠素 h	10127	407.5	黄色固体溶于水或PBS缓冲液
腔肠素（天然）	10110	423.5	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素h	10111	407.5	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素cp	10112	415.5	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素	10113	399.5	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素f	10114	425.5	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素	10115	457.5	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素ip	10116	389.5	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素	10117	417.5	黄色固体溶于MeOH
腔肠素i	10121	533.4	黄色固体溶于MeOH或EtOH
腔肠素e	10124	449.5	溶于MeOH和EtOH的深棕色固体
腔肠素 400a (DeepBlueC™)	10125	391.5	灰白色至粉红色固体，溶于乙醇
甲基腔肠素	10122	331.4	黄色固体溶于MeOH和EtOH

已经合成了十几种腔肠素类似物，其中许多现在可以从 Biotium 买到。这些腔肠素类似物在发射波长、细胞膜渗透性和量子效率方面具有不同的特性。表 1 和表 2 分别总结了具有海肾荧光素酶和载脂蛋白的腔肠素衍生物的发光特性。

Biotium 提供腔肠素 400a（也称为 DeepBlue C™）（目录号 10124），它作为海肾荧光素酶 (Rluc)的底物并产生以 400 nm 为中心的发射峰。它是 BRET 研究的首选海肾荧光素酶底物，因为它对 GFP 受体的发射干扰最小。

此外，请参阅我们的水溶性 Aquaphile™ 腔肠素，以天然腔肠素（目录号 10126）或腔肠素 h 类似物（目录号 10127）出售。这些制剂容易溶解在水或缓冲液中供体内使用。

最后，Biotium 提供甲基腔肠素（coelenterazine，2-甲基类似物）（目录号 10122），据报道，它是细胞对抗活性氧 (ROS)（如单线态氧和超氧阴离子）的卓越抗氧化剂。腔肠素衍生物具有膜渗透性、无毒且对 ROS 具有高反应性。有关腔肠素类似物的比较，请参阅支持文件下的腔肠素传单。

表 1. 腔肠素类似物与海肾荧光素酶的发光特性*

模拟	发射最大值 (nm)	总光 (%)	初始强度
腔肠素（天然）	475	100	45
腔肠素h	475	41	135
腔肠素cp	470	23	135
腔肠素f	473	28	45
腔肠素	475	47	900
腔肠素e	418、475	137	900
腔肠素 400a (DeepBlueC)	400	---	---

*来自生化的数据。生物物理学。水库。公社。233,349 (1997)。

表 2. Coelenterazine 类似物与 Apoaequorin 的发光特性*

模拟	发射最大值 (nm)	相对发光容量	相对强度	半上升时间 (s)
腔肠素（天然）	465	100	1.00	0.4-0.8
腔肠素h	475	0.82	10	0.4-0.8
腔肠素cp	442	0.95	15	0.15-0.3
腔肠素	444	0.67	190	0.15-0.3
腔肠素f	473	0.80	18	0.4-0.8
腔肠素	467	0.26	0.01	5个
腔肠素ip	441	0.54	47	1个
腔肠素	452	0.57	135	0.4-0.8
腔肠素i	476	0.70	0.03	8个
腔肠素e	405、465	0.50	4个	0.15-0.3

*来自生化的数据。J. 261, 913 (1989)

参考

1）冰毒。细胞生物学。40, 305(1994)。
2）冰毒。酵素。172, 164(1989)。
3) J. 细胞生物学。115, 1259(1991)。
4) 细胞钙, 14, 373(1993).
5）过程。国家队。学院。科学。美国 96, 151(1999)。
6）过程。国家队。科学。美国 97, (7), 3684 (2000)。
7) 自由基。生物学。医学。28, 1232(2000)。
8）循环。水库。84, 1203(1999)。
9）免疫学。今天 15, 7(1994)。
10）肛门。生化。206, 273(1992)。
11) 生物化学。生物物理学。水库。公社。233, 349(1997)。
12) 分子成像, 3 (1), 43(2004)。
13) 生物化学。药效学。60, 471(2000)。
14) 生物化学。J. 261, 913(1989)。
15) 细胞钙, 12, 635(1991)。

产品属性

CAS编号： 114496-02-5, 123437-16-1, 123437-22-9, 123437-25-2, 123437-32-1, 123437-33-2, 50909-86-9, 55779-48-1, 70217- 82-2

常见问题

我们的大多数产品在室温下可稳定保存数日，因此产品很可能仍能正常工作。为了安全起见，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前，先进行小规模的阳性对照实验，以确认该产品仍然适用于您的应用。

我们知道的一个例外是 GelGreen™，它比我们大多数其他荧光染料对光照更敏感。如果 GelGreen™ 长时间（数天至数周）暴露在环境光下，其颜色将从深橙色变为砖红色。如果发生这种情况，GelGreen 将不再适用于凝胶染色。

Promega测定	Promega 目录号	生物素替代品	Biotium 目录号	检测类型	笔记
Steady-Glo® 分析系统	E2510、E2520、E2550	Steady-Luc™ 萤火虫 HTS 检测试剂盒	30028	辉光	信号半衰期约为 3 小时。根据需要将荧光素酶底物添加到检测缓冲液中，因此信号在试剂盒储存期间不会下降。
Steady-Luc™ 萤火虫 HTS 检测试剂盒（冻干）	30028L	辉光	信号半衰期约为 3 小时。冻干形式，便于运输和储存。
萤火虫荧光素酶检测系统	E1483、E1500、 E1501、E4030、 E4530、E4550	萤火虫荧光素酶检测试剂盒 2.0	30085	闪光	根据需要将荧光素酶底物添加到检测缓冲液中，因此信号在试剂盒储存期间不会下降。
萤火虫荧光素酶检测试剂盒（冻干）	30075	闪光	冻干形式，便于运输和储存。
海肾荧光素酶检测系统	E2810, E2820	海肾荧光素酶检测试剂盒 2.0	30082	闪光	含有 Biotium 的水溶性 Aquaphile™ 腔肠素。
Dual-Luciferase® 检测系统（萤火虫和海肾）	E1910, E1960, E1980	萤火虫和海肾萤光素酶单管检测试剂盒	30081	闪光	在一个试管中依次测量同一样本中的萤火虫和海肾荧光素酶活性。
CellTiter-Glo® 发光细胞活力测定	G7570、G7571、 G7572、G7573	ATP-Glo™ 细胞活力测定	30020	闪光	Cell Titer Glo® 是一种发光型测定（5 小时半衰期）；ATP-Glo™ 是一种闪光型检测（信号稳定 1 分钟）。

生物科学试剂盒
产品信息表上列出了自收到生物科学试剂盒之日起保证的保质期。一些套件在套件盒标签上印有有效期，这是从产品从我们工厂发货之日算起的保证保质期。套件的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧试剂盒，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该试剂盒仍适用于您的应用。

抗体和其他偶联物
产品信息表上列出了抗体和偶联物自收货之日起的保证保质期。抗体和其他结合物的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧偶联物，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该产品仍适用于您的应用。

对于冻干抗体，我们建议用甘油和抗菌防腐剂（如叠氮化钠）重构抗体以获得最长的保质期（请注意，叠氮化钠与 HRP 偶联物不相容）。

化学品、染料和凝胶染色剂
Biotium 保证化学品、染料和凝胶染色剂在您收到产品之日起至少一年内保持稳定。然而，只要按照建议储存，这些产品中的大多数在多年内都非常稳定。存储条件可在产品信息表或产品安全和数据表、材料安全数据表以及产品标签上找到。荧光化合物应避光以便长期储存。

如果您希望使用已储存超过一年的 Biotium 化合物，我们建议您进行小规模阳性对照实验，以确认该化合物在处理大量样品或珍贵样品之前仍适用于您的应用样品。

基于生产日期的有效期 (DOM)
如果您的机构要求您记录基于试剂生产日期的有效期，请联系 techsupport@biotium.com 寻求帮助。

有特殊稳定性考虑的化工产品：

酯类

酯类化合物包括：
• 琥珀酰亚胺酯（SE，也称为 NHS 酯），例如我们的胺反应性染料
• 乙酰氧基甲基酯（AM 酯），例如我们的膜渗透性离子指示剂染料
• 二乙酸酯改性染料，例如 ViaFluor ™ 405、CFDA 和 CFDA-SE 细胞活力/细胞增殖染料

只要避光和防潮，酯类染料在固体形式下是稳定的。酯在水溶液中不稳定。应在无水 DMSO中制备浓缩储备液（参见 Biotium 目录号90082）。无水 DMSO 中的储备液可在 -20°C 下干燥保存一个月或更长时间。酯类应在使用前立即用水溶液稀释。琥珀酰亚胺酯 (SE) 应溶解在不含会与 SE 官能团反应的含胺化合物（如 Tris、甘氨酸或蛋白质）的溶液中。AM 酯和二乙酸化合物应溶解在不含血清的溶液中，因为血清可能含有会水解该化合物的酯酶。

关于 CF® 染料琥珀酰亚胺酯稳定性的说明

琥珀酰亚胺酯 (SE) 通常容易水解，从而导致标记效率降低。许多用于生命科学研究的市售荧光染料都是高度磺化的染料，这使得它们特别容易吸湿，从而加剧了水解问题。此外，对于几种市售的 SE 活性染料，SE 基团衍生自芳香族羧酸，而 Biotium 的所有 CF® 染料中的 SE 基团均由脂肪族羧酸制备。这种结构差异降低了 CF® Dye SE 反应基团对水解的敏感性，从而产生相对稳定的活性染料，与其他荧光染料的其他 SE 衍生物相比，标记效率始终更高。

马来酰亚胺、MTS 和硫代硫酸盐染料
与琥珀酰亚胺酯染料一样，这些染料也容易水解，尽管水解程度通常要低得多。因此，对于长期储存，建议使用无水 DMSO 制备储备溶液。

其他活性染料
胺类、氨氧基（也称为甲醛）、酰肼、叠氮化物、炔烃、BCN 和酪胺类活性染料，以及染料游离酸，在-20°C 下储存 6-12 年时通常在水溶液中稳定几个月或更长时间，只要不存在可能与染料的官能团发生反应的化合物。有关特定活性染料的更多信息，请参阅产品信息表。

腔肠素和 D-荧光素

按照建议储存时，腔肠素以固体形式稳定；它们在水溶液中不稳定。应在乙醇或甲醇中制备浓缩腔肠素储备液（通常为 1-100 mg/mL）；不要使用 DMSO 或 DMF 溶解腔肠素，因为这些溶剂会氧化化合物。腔肠素的乙醇或甲醇库存可在 -20°C 或以下储存六个月或更长时间；酒精储备在储存过程中可能会蒸发，因此请使用密封的螺旋盖小瓶并用封口膜包裹小瓶以进行长期储存。丙二醇也可用作溶剂以减少蒸发。如果溶剂蒸发，腔肠素仍会存在于小瓶中，因此在储存前记下小瓶中的体积，以便您可以根据需要调整溶剂体积以校正蒸发。使用前立即在水性缓冲液中制备工作溶液。腔肠素在水溶液中最多可稳定 5 小时。

Aquaphile™ 腔肠素是腔肠素的水溶性制剂。当按照建议储存时，它们以固体形式稳定。Aquaphile™ 腔肠素应在使用前立即溶解在水溶液中。它们在水溶液中最多可稳定 5 小时。

请注意，腔肠素主要是黄色固体，但可能含有深红色或棕色斑点。这不会影响产品稳定性或性能。如果您的腔肠素呈均匀的棕色，则说明它已被氧化，需要更换。

D-荧光素在固体形式下是稳定的，并且在按照建议储存时作为浓缩储备液；它在水溶液中的稀释工作浓度下不稳定。在水中制备浓缩的 D-荧光素储备溶液（通常为 1-100 mg/mL），并在 -20°C 或更低温度下分装储存六个月或更长时间。使用前立即准备工作解决方案。