TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher, 20X in DMF, 是一种新型试剂，可在用于免疫荧光染色的组织切片中淬灭脂褐素自发荧光。

• 消除脂褐质自发荧光

• 减少来自非脂褐质来源的自发荧光

• 与苏丹黑 B 不同，不会导致高背景

• 可在免疫荧光染色之前或之后使用

• 为人类和老年动物组织的荧光成像扫清了道路

TrueBlack® 可有效消除人和小鼠大脑和视网膜等组织中的脂褐质自发荧光（参见图 1-3 和 TrueBlack® 参考文献）。脂褐质由高度自发荧光的氧化蛋白质和脂质颗粒组成，这些颗粒在老化细胞的溶酶体中积聚。脂褐质颗粒在用于荧光显微镜检查的所有通道中都发出明亮的荧光，并随着年龄的增长在各种细胞和组织类型中积累。因此，在某些成人人体组织或老年动物组织中对特定免疫荧光信号进行成像实际上是不可能的，除非采用方法来淬灭或掩盖脂褐质荧光。

TrueBlack® 可淬灭具有比苏丹黑 B 更少背景的脂褐质

传统上，苏丹黑 B 已被用于在免疫荧光染色后通过用染料孵育组织切片来淬灭脂褐素自发荧光。然而，虽然它掩盖了脂褐质的自发荧光，但苏丹黑 B 还在红色和远红色通道中引入了均匀的非特异性背景荧光（图 1），从而限制了这些波长中荧光染料的使用。现在 Biotium 开发了 TrueBlack® 作为苏丹黑 B 的优越替代品。TrueBlack® 可淬灭脂褐质荧光，而红色/远红色背景荧光的增加要少得多（图 1）。TrueBlack® 处理可以在免疫染色之前或之后进行。它快速、简单，对荧光抗体或核复染的信号影响最小，从而保持免疫染色的信噪比（图 2-3）。

TrueBlack® 可以减少脂褐质以外来源的自发荧光

TrueBlack® 还可以减少来自其他来源的自发荧光，例如胶原蛋白、弹性蛋白、红细胞和一般背景荧光。它在猝灭这些自发荧光源方面不如对脂褐质有效，但它可以改善人类和非人类组织类型的背景（图 4-5）。TrueBlack® 还被用于淬灭聚碳酸酯滤光片上的背景荧光，这些滤光片用作成像细胞计数的细胞支持物。

TrueBlack® Lipofuscin Autofluorescence Quencher 属于我们用于荧光应用的 TrueBlack® 背景降低剂系列，其中包括用于蛋白质印迹的TrueBlack® WB Blocking Buffer Kit ，以及用于阻断非特异性免疫荧光染色的TrueBlack® IF 背景抑制系统（透化） 。另请参阅我们用于免疫荧光染色和其他应用的其他附件产品。

TrueBlack® Plus：一种独特的脂褐质淬灭剂，远红背景低于原版 TrueBlack®

Biotium 还开发了TrueBlack® Plus（目录号 23014），这是一种下一代脂褐素猝灭剂，其远红背景比原来的 TrueBlack®（目录号 23007）更低。TrueBlack® Plus 也是唯一一种可用于水性缓冲液而非 70% EtOH 的脂褐素淬灭剂，可延长厚组织样品的孵育时间而不会收缩。

 TrueBlack® 可淬灭具有比苏丹黑 B 更少背景的脂褐质

图 1. 甲醇固定成人脑切片中的脂褐质自发荧光。在未经处理的组织（顶行）中，脂褐质以荧光颗粒的形式出现，在所有荧光通道中都发出荧光。苏丹黑 B（中行）掩盖了脂褐质自发荧光，但在红色和远红色通道中引入了背景。TrueBlack®（下排）掩蔽脂褐质，荧光背景增加最小（下排）。根据产品方案，甲醇固定的成人大脑皮层冷冻切片未经处理或用 70% 乙醇中的 0.1% 苏丹黑 B 或 1X TrueBlack® 染色。样品在蔡司 LSM 700 共聚焦显微镜的 FITC（绿色）、Cy®3（红色）和 Cy®5（远红色）通道中以相同的增益设置成像。

 TrueBlack® 处理可以在免疫荧光染色之前或之后进行

图 2. 免疫荧光染色前使用 TrueBlack® 预处理淬灭脂褐质自发荧光。甲醛固定的人皮层冷冻切片未经处理 (A) 或用 TrueBlack® (B) 处理，然后用 CF®488A 抗 NeuN 抗体偶联物（绿色）和 DAPI（蓝色）染色。在蔡司 LSM700 共聚焦显微镜上的所有通道中对切片进行成像。A. 脂褐质在所有通道中都发出明亮的荧光，在未经处理的组织的合并图像中显示为白点（红色箭头）。B. TrueBlack® 预处理消除了脂褐质自发荧光，对特定染色的影响可以忽略不计。

图 3. 免疫荧光染色后使用 TrueBlack® 后处理淬灭脂褐质自发荧光。人大脑皮层的甲醇固定冷冻切片先用兔抗 GFAP 染色，然后用 CF®640R 山羊抗兔（货号 20176）和 DAPI（货号 40009）染色。切片未经处理或用 TrueBlack® 处理，然后安装在 EverBrite 封固剂中（货号 23001）。未经处理的切片（左）除了 GFAP 免疫荧光（胶质突起，品红色）和 DAPI 染色（细胞核，蓝色）外，还显示出脂褐质自发荧光（白色箭头）。TrueBlack®（右）消除了脂褐质荧光，同时为远红通道（品红色）和核复染（蓝色）中的 GFAP 免疫染色保持良好的信噪比。

 TrueBlack® 可以减少脂褐质以外来源的自发荧光

图 4. TrueBlack® 可减少 FITC、Cy®3 和 Cy®5 通道中人肾切片中的非脂褐质自发荧光。人肾冷冻切片在冰冷的甲醇中固定，细胞核用 DAPI（蓝色）染色。自发荧光在 Zeiss LSM 700 共聚焦显微镜上在所有通道中成像，两个样品的成像设置相同。底板：TrueBlack® 处理。

图 5. TrueBlack® 可减少大鼠肾脏组织切片中 FITC 通道中的非脂褐质自发荧光。将大鼠肾冷冻切片固定在甲醛中，未经处理 (A) 或用 TrueBlack® (B) 处理。细胞核用 DAPI（蓝色）染色。FITC 通道（绿色）中的自发荧光在 Zeiss LSM700 共聚焦显微镜上对每个样品使用相同的成像设置进行成像。