Caspase-8 荧光和比色检测试剂盒提供了一个简单的检测系统，用于通过哺乳动物细胞中的荧光或吸光度快速、高灵敏度地检测 caspase-8 活性。Biotium 还提供 Caspase-IETD-R110 荧光 HTS 检测试剂盒 ( 30012 )，这是一种用于高通量筛选 (HTS) 的一步荧光检测

特征

• 用底物 (Ac-IETD)2-R110 测量的 Caspase-8 活性

• 与荧光和比色检测系统兼容

• 快速酶动力学

• 酶促反应形成黄绿色荧光R110产物

• 终点检测需要细胞裂解

套件组件

• 细胞裂解缓冲液

• 检测缓冲液

• 酶底物 (Ac-IETD)2-R110

• 酶抑制剂Ac-IETD-CHO

• R110

关于这个套件

Caspase-8 是 CD95/Fas 凋亡通路中最上游的半胱天冬酶，被 CD95/Fas 和 TNF 的信号通路激活。荧光和显色底物 (Ac-IETD)2-R110 包含两个 IETD 四肽，并在两个连续步骤中被 caspase-8 完全水解。第一个 IETD 肽的切割产生单肽 Ac-IETD-R110 中间体，其吸收和发射波长类似于 R110（罗丹明 110）（Ex/Em=496/520 nm），但只有约 10%后者的荧光。第二个 IETD 肽的水解释放染料 R110，导致荧光显着增加。

虽然最终产品的荧光检测由于其优越的灵敏度而被优选，但也可以通过吸光度检测。事实上，R110 的消光系数比显色底物中常用的染料对硝基苯胺 (pNA) 的消光系数高 10 倍，这使得基于 R110 的底物明显比基于 pNA 的底物敏感，即使通过比色检测也是如此。

该检测试剂盒包含 Ac-IETD-CHO，它是一种 caspase-8 抑制剂，可用作阴性对照。试剂盒中还提供了 R110，用于生成标准曲线，可用于量化 caspase-8 活性。

注意：与其他底物序列相比，caspase-8 优先切割共有序列 IETD，但其他 caspase-3 等 caspase-3 也可以有效切割 IETD。重叠的半胱天冬酶底物识别限制了半胱天冬酶底物肽在区分细胞裂解物中不同半胱天冬酶活性方面的有用性。