Dual Apoptosis Assay with NucView® 488 Caspase-3 Substrate & Annexin V
- CF®594
- CF®640R
- Sulforhodamine 101 (Texas Red®)
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这些试剂盒提供两种细胞凋亡标记物，即我们的新型 NucView® 488 Caspase-3 底物和荧光 CF® 染料 Annexin V，用于检测两个重要的细胞凋亡事件，caspase-3 激活和磷脂酰丝氨酸 (PS) 易位。
特征
检测半胱天冬酶活性和磷脂酰丝氨酸暴露
快速，15-30 分钟染色
用于流式细胞术或荧光显微镜
甲醛固定
选择红色或远红色荧光 Annexin V
采用明亮且耐光的 CF® 染料
套件组件
NucView® 488 Caspase-3 底物，0.2 mM 溶于 DMSO
Annexin V 偶联物的选择（人类、重组、大肠杆菌生产）
5X 膜联蛋白结合缓冲液
Ac-DEVD-CHO Caspase-3 抑制剂，2 mM 溶于 DMSO
光谱特性
NucView® 488：Ex/Em 500/530 nm（切割后，含 DNA）
Texas Red® Annexin V：Ex/Em 594/615 nm
CF®594 膜联蛋白 V：Ex/Em 593/614 nm
CF®640R 膜联蛋白 V：Ex/Em 642/662 nm
即使在同一群体中，细胞凋亡率也因细胞而异。因此，伴随细胞凋亡过程的各种细胞凋亡事件或标志物在细胞之间也不同地发生。因此，重要的是能够在单个细胞的基础上检测这些细胞凋亡事件。传统上，使用膜不可渗透的荧光酶底物（如 DEVD-R110）或荧光标记的抑制剂（如 FLICA 试剂）检测半胱天冬酶活性。在前一种情况下，需要细胞裂解，因此无法检测活细胞中的半胱天冬酶活性。此外，此类 caspase 测定仅测量给定时间高度异质性细胞群的平均 caspase 活性。在后一种情况下，尽管 FLICA 试剂可以进入活细胞以检测 caspase 活性，
与传统的 caspase 检测不同，NucView® 488 Caspase-3 底物以无干扰的方式检测单个全细胞内的 caspase-3 活性。底物由荧光 DNA 染料和 caspase-3 特异的 DEVD 底物部分组成。底物既不发荧光又不具有 DNA 染料的功能，它迅速穿过细胞膜进入细胞质，在那里它被 caspase-3 裂解形成高亲和力的 DNA 染料，将细胞核染成鲜绿色。因此，NucView® 488 caspase-3 底物具有双功能，可以检测 caspase-3 活性并可视化凋亡细胞核形态。
该试剂盒包含足以进行 50 次流式细胞术测定（200 uL 测定体积）的试剂。可以使用该试剂盒进行的荧光显微镜检测的次数可能会根据所用培养容器的大小和染色体积而有所不同。
要了解使用 NucView® caspase-3 底物监测细胞凋亡的优势，请访问 NucView® 技术页面。
NucView 是 Biotium 的注册商标。NucView 酶底物技术受美国专利保护。Texas Red 是 Thermo Fisher Scientific 的注册商标。
参考
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5. 生药学研究 (2010) 2(2), 113-119。doi: 10.4103/0974-8490.62949
6. Mol Cancer Res (2013) 11(4), 405–17。DOI：10.1158/1541-7786.MCR-12-0551
7. 干细胞 (2013) 31、1121–1135。doi: 10.1002/stem.1368
8. 干细胞 (2013) 31, 2374–2387. https://doi.org/10.1002/stem.1509
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10. PLoS Genet (2014) 10(10), e1004594。doi:10.1371/journal.pgen.1004594
11. Cancer Gene Therapy (2016) Cancer Gene Ther 23(6), 178-87。doi:10.1038/cgt.2016.18
12. 当前癌症药物目标 (2018) 18, 1-9。DOI:10.2174/1568009617666171114144236
13. Sci Rep (2018) 8, 13192. DOI:10.1038/s41598-018-31575-3
在支持文档下找到 NucView® 参考文献列表和经过验证的细胞系列表。
我们的大多数产品在室温下可稳定保存数日，因此产品很可能仍能正常工作。为了安全起见，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前，先进行小规模的阳性对照实验，以确认该产品仍然适用于您的应用。
我们知道的一个例外是 GelGreen™，它比我们大多数其他荧光染料对光照更敏感。如果 GelGreen™ 长时间（数天至数周）暴露在环境光下，其颜色将从深橙色变为砖红色。如果发生这种情况，GelGreen 将不再适用于凝胶染色。
生物科学试剂盒
产品信息表上列出了自收到生物科学试剂盒之日起保证的保质期。一些套件在套件盒标签上印有有效期，这是从产品从我们工厂发货之日算起的保证保质期。套件的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧试剂盒，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该试剂盒仍适用于您的应用。
抗体和其他偶联物
产品信息表上列出了抗体和偶联物自收货之日起的保证保质期。抗体和其他结合物的功能通常比保证的保质期长得多。如果您希望使用存储中的旧偶联物，我们建议在处理大量样品或珍贵样品之前进行小规模阳性对照实验以确认该产品仍适用于您的应用。
对于冻干抗体，我们建议用甘油和抗菌防腐剂（如叠氮化钠）重构抗体以获得最长的保质期（请注意，叠氮化钠与 HRP 偶联物不相容）。
化学品、染料和凝胶染色剂
Biotium 保证化学品、染料和凝胶染色剂在您收到产品之日起至少一年内保持稳定。然而，只要按照建议储存，这些产品中的大多数在多年内都非常稳定。存储条件可在产品信息表或产品安全和数据表、材料安全数据表以及产品标签上找到。荧光化合物应避光以便长期储存。
如果您希望使用已储存超过一年的 Biotium 化合物，我们建议您进行小规模阳性对照实验，以确认该化合物在处理大量样品或珍贵样品之前仍适用于您的应用样品。
基于生产日期的有效期 (DOM)
如果您的机构要求您记录基于试剂生产日期的有效期，请联系 techsupport@biotium.com 寻求帮助。
有特殊稳定性考虑的化工产品：
酯类
酯类化合物包括：
• 琥珀酰亚胺酯（SE，也称为 NHS 酯），例如我们的胺反应性染料
• 乙酰氧基甲基酯（AM 酯），例如我们的膜渗透性离子指示剂染料
• 二乙酸酯改性染料，例如 ViaFluor ™ 405、CFDA 和 CFDA-SE 细胞活力/细胞增殖染料
只要避光和防潮，酯类染料在固体形式下是稳定的。酯在水溶液中不稳定。应在无水 DMSO中制备浓缩储备液（参见 Biotium 目录号90082）。无水 DMSO 中的储备液可在 -20°C 下干燥保存一个月或更长时间。酯类应在使用前立即用水溶液稀释。琥珀酰亚胺酯 (SE) 应溶解在不含会与 SE 官能团反应的含胺化合物（如 Tris、甘氨酸或蛋白质）的溶液中。AM 酯和二乙酸化合物应溶解在不含血清的溶液中，因为血清可能含有会水解该化合物的酯酶。
关于 CF® 染料琥珀酰亚胺酯稳定性的说明
琥珀酰亚胺酯 (SE) 通常容易水解，从而导致标记效率降低。许多用于生命科学研究的市售荧光染料都是高度磺化的染料，这使得它们特别容易吸湿，从而加剧了水解问题。此外，对于几种市售的 SE 活性染料，SE 基团衍生自芳香族羧酸，而 Biotium 的所有 CF® 染料中的 SE 基团均由脂肪族羧酸制备。这种结构差异降低了 CF® Dye SE 反应基团对水解的敏感性，从而产生相对稳定的活性染料，与其他荧光染料的其他 SE 衍生物相比，标记效率始终更高。
马来酰亚胺、MTS 和硫代硫酸盐染料
与琥珀酰亚胺酯染料一样，这些染料也容易水解，尽管水解程度通常要低得多。因此，对于长期储存，建议使用无水 DMSO 制备储备液。
其他活性染料
胺类、氨氧基（也称为甲醛）、酰肼、叠氮化物、炔烃、BCN 和酪胺类活性染料，以及染料游离酸，在-20°C 下储存 6-12 年时通常在水溶液中稳定几个月或更长时间，只要不存在可能与染料的官能团发生反应的化合物。有关特定活性染料的更多信息，请参阅产品信息表。
腔肠素和 D-荧光素
按照建议储存时，腔肠素以固体形式稳定；它们在水溶液中不稳定。应在乙醇或甲醇中制备浓缩腔肠素储备液（通常为 1-100 mg/mL）；不要使用 DMSO 或 DMF 溶解腔肠素，因为这些溶剂会氧化化合物。腔肠素的乙醇或甲醇库存可在 -20°C 或以下储存六个月或更长时间；酒精储备在储存过程中可能会蒸发，因此请使用密封的螺旋盖小瓶并用封口膜包裹小瓶以进行长期储存。丙二醇也可用作溶剂以减少蒸发。如果溶剂蒸发，腔肠素仍会存在于小瓶中，因此在储存前记下小瓶中的体积，以便您可以根据需要调整溶剂体积以校正蒸发。使用前立即在水性缓冲液中制备工作溶液。腔肠素在水溶液中最多可稳定 5 小时。
Aquaphile™ 腔肠素是腔肠素的水溶性制剂。当按照建议储存时，它们以固体形式稳定。Aquaphile™ 腔肠素应在使用前立即溶解在水溶液中。它们在水溶液中最多可稳定 5 小时。
请注意，腔肠素主要是黄色固体，但可能含有深红色或棕色斑点。这不会影响产品稳定性或性能。如果您的腔肠素呈均匀的棕色，则说明它已被氧化，需要更换。
D-荧光素在固体形式下是稳定的，并且在按照建议储存时作为浓缩储备液；它在水溶液中的稀释工作浓度下不稳定。在水中制备浓缩的 D-荧光素储备溶液（通常为 1-100 mg/mL），并在 -20°C 或更低温度下分装储存六个月或更长时间。使用前立即准备工作解决方案。
我们的大多数产品在室温下可稳定保存数天，但我们建议在 4°C 或 -20°C 下储存以延长保质期。对于我们的许多染料水溶液，这些化合物在室温下非常稳定，但我们建议冷藏以防止霉菌或其他微生物随着时间的推移而生长。因此，为节省运输成本，建议在 4°C 或 -20°C 下储存的产品可以在环境温度下或使用冰袋运输。这些产品可能会解冻而不影响产品性能。当您收到产品时，请将其置于推荐的存储条件下。
一些产品随附蓝色冰袋作为额外的高温预防措施。蓝色冰袋可在到达时解冻，而不会影响产品性能。