Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR Master Mix (2-Color Tracking)
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2X Forget-Me-Not™ EvaGreen® qPCR 主混合液是一种随时可用的高性能染料基主混合液，用于qPCR和DNA熔融曲线分析。2X Master Mix含有EvaGreen®染料、Cheetah™ HotStart Taq DNA聚合酶、dNTP和低浓度惰性蓝色染料，使用户可以轻松区分含有反应混合物的微孔和空微孔。对于双色跟踪，请将模板与“Forget-Me-Not™”混合使用™ Template Buffer（模板缓冲区），一目了然地查看哪些井具有主混合液或模板。
准备使用，只需添加引物和DNA模板
优级EvaGreen®染料比SYBR®Green I更敏感，与HRM®兼容
使用“Forget-Me-Not™ 2-color tracking”防止浪费样品和代价高昂的错误™ 双色跟踪
Cheetah配方™ 快速循环协议的HotStart Taq
直接显示凝胶中的扩增产物荧光
无ROX或单独ROX可与任何PCR仪器一起使用
Figure 1. Left: 1X Forget-Me-Not™ Master Mix. Right: 1X Forget-Me-Not™ Master Mix after addition of DNA template mixed with Forget-Me-Not™ Template Buffer.
防止浪费和捕捉错误
捕捉移液错误，避免浪费时间、试剂和宝贵的DNA样本。双色跟踪Forget-Me-No™ EvaGreen®qPCR主混合液是一种独特的组合，它由一种含有低浓度蓝色染料的主混合液和一种含有高浓度蓝色颜料的DNA模板缓冲液组成。当你加2倍的时候Forget-Me-Not™ Master Mix™ 主混合到您的反应，它显示为浅蓝色（图1，左）。然后，when you add template containing Forget-Me-Not™ Template Buffer to the reaction，颜色变成深蓝色（图1，右）。Forget-Me-No™ 如果不需要双色跟踪，则“模板缓冲区”是可选的。你也可以用Forget-Me-Not™ ™ EvaGreen®qPCR主混合（低ROX或高ROX），与ROX预混合，允许单色跟踪。
Peace of Mind Plus PCR 性能
Forget-Me-Not™qPCR Master Mix用于快速循环PCR参数，但也可用于常规循环协议。在实时PCR分析中，它的性能与Fast EvaGreen®Master Mix一样好，甚至优于Qiagen的QuantiNova®SYBR®Green PCR Master Mish（图2），同时您可以轻松确保每次第一次都正确设置您的反应。
图2实时PCR数据比较Forget-Me-Not™ （蓝线）与Biotium的Fast EvaGreen®（绿线）和Qiagen的QuantiNova®SYBR®green（灰线）主混音。
A、 线性放大曲线。与基于SYBR®Green的混合液相比，基于EvaGreen®染料的混合液产生更高的信号。
B、 对数标度上的放大曲线。Forget-Me-Not™ 性能与其他主混音一样好或更好。NTC：非模板控件（虚线）。
EvaGreen® Dye
一种环保、无诱变、无细胞毒性的DNA结合染料，具有qPCR和高分辨率Melt®（HRM）分析的理想特性。EvaGreen®染料通过一种新的“按需释放”机制与dsDNA结合，防止染料从扩增子转移到扩增子，并允许在无PCR抑制的情况下在qPCR中使用相对较高的染料浓度。
Cheetah™ HotStart Taq
Cheetah™HotStart Taq DNA聚合酶是Biotium公司专有的化学修饰热启动DNA聚合酶酶。Cheetah™ Taq在室温下完全不活跃，在95°C下2分钟后完全激活，特别适合快速循环PCR协议。
ROX Reference Dye
在某些qPCR系统中，ROX被要求作为被动参考染料，以补偿孔与孔之间的光学变化。实时PCR仪器的被动染料要求见下表。产品#31041不含ROX，而产品#31042配有单独的ROX小瓶。对于预混料ROX的主混音，请使用Forget-Me-Not™ EvaGreen®qPCR主混合（低ROX或高ROX）
| Reference Dye | PCR Instrument |
|---|---|
| Low ROX (~50 nM) | Applied Biosystems®: 7500, 7500 Fast, ViiA™7, Quant-Studio™ instruments Stratagene (Agilent): MX4000P, MX3000P, MX3005P |
| High ROX (~500 nM) | Applied Biosystems®: 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast, StepOne™, StepOnePlus™ |
| No ROX required* | BioRad: iCycler™, MyiQ™, MiQ™ 2, iQ™ 5, CFX-96 Touch™, CFX-384 Touch™ and Connect™, Chromo4™, MiniOpticon™ Qiagen: Rotor-Gene® Q, Rotor-Gene® 3000, Rotor-Gene®6000 Eppendorf: Mastercycler® Realplex Illumina: Eco™ RealTime PCR System Cepheid: SmartCyler® Roche: LightCycler® 480, LightCycler® 2.0 |
| Fluorescein** | BioRad: iCycler™, MyiQ™, MiQ™, iQ™ |
*不需要ROX参考染料的仪器通常与含有ROX的qPCR主混合液兼容（使用前与制造商核实）。
**Bio-Rad的iCycler™ 用户无需向PCR反应中添加荧光素，因为EvaGreen®染料具有轻微的背景荧光，可提供足够稳定的基线水平荧光。
EvaGreen Dye和Cheetah Taq拥有美国和国际专利。QuantiNova是Qiagen Group的注册商标。SYBR是赛默飞世尔科技公司的注册商标。HRM是爱达荷技术公司/BioFire Defense，LLC的注册商标；使用HRM 可能需要许可证。
EvaGreen® 染料在光谱上与 FAM 或 SYBR® Green I 相似，这意味着使用基于 EvaGreen® 的预混液无需更改光学设置。但是，染料之间存在一些差异。
较低的背景荧光： EvaGreen® 染料由于其新颖的“按需释放”DNA 结合机制，比 SYBR® Green I 具有更少的背景。
更明亮且无抑制性： EvaGreen® 在 PCR 反应中的抑制性低于 SYBR® Green，允许使用饱和染料浓度以获得最大信号和更好的高分辨率 DNA 熔解分析。
更安全、更环保： EvaGreen® 染料是迄今为止第一种也是唯一一种对环境安全的 PCR 染料。
染料稳定性： EvaGreen® 染料在储存期间和 PCR 条件下都非常稳定。另一方面，众所周知，SYBR® Green I 在多次冻融循环后和 PCR 条件下会降解。此外，据报道，分解的 SYBR® Green I 对 PCR 的抑制作用更大。
数字 PCR： EvaGreen® 染料是目前唯一用于液滴数字 PCR (ddPCR) 的 qPCR 染料。