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为方便起见,许多客户使用 GelRed® 或 GelGreen® 预制凝胶。然而,由于 GelRed® 和 GelGreen® 是高亲和力染料,设计为较大的染料以提高其安全性,因此它们会影响 DNA 在预制凝胶中的迁移。一些样品,例如限制性消化的 DNA,可能会在 GelRed® 或 GelGreen® 预制凝胶中异常迁移。
提示 #1:加载更少的 DNA
GelRed® 或 GelGreen® 预制凝胶中的污迹和微笑最常由 DNA 超载引起。如果您看到条带迁移发生变化或出现拖尾和微笑,请尝试减少加载的 DNA 量。已知浓度的 ladder 和样品的推荐上样量为 50-200 ng/泳道。对于未知浓度的样品,尝试加载通常量的一半或三分之一的 DNA。这通常可以解决带迁移问题。
提示 #2:尝试染色后方案
为避免染料可能对 DNA 迁移产生任何干扰,我们建议使用染色后方案。如果您的应用需要加载超过推荐量的 DNA,请使用染色后方案。虽然我们建议将凝胶染色后 30 分钟,但您可能会在短短五分钟内看到条带,具体取决于存在的 DNA 量。染色后溶液可以重复使用。有关详细方案,请参阅GelRed® 产品信息表或GelGreen® 产品信息表。
提高琼脂糖凝胶分辨率的其他技巧:
如果您在使用 GelRed® 或 GelGreen® 进行后染色后发现 DNA 迁移问题或拖尾,则问题不是由核酸染料引起的。避免过度填充凝胶孔,以防止 DNA 弄脏凝胶表面。
倒入较低百分比的琼脂糖凝胶。较高分子量的 DNA 使用较低百分比的凝胶分离效果更好。
更改运行缓冲区。TBE 缓冲液比 TAE 缓冲液具有更高的缓冲能力。
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