由于加样操作的误差、离心管透光性能的差异、光程差异，仪器收集到的原始信号必须进行归一化校正，以消除这些因素对定量结果的影响。这种校正可以通过在反应体系中添加额外的荧光染料来实现，一般采用红色ROX荧光，称为阳性参比信号。最后，样品的实际荧光值除以ROX的实际荧光值，得出Rn值，这样光程差的影响就消除了。ROX校正可以提高定量数据的精度和重现性，减少孔间差异。