Live -or-Dye™ 可固定活性染色剂，包括Live-or-Dye NucFix™ Red，是胺反应性的死细胞染色剂。染料的这种特性使染色与固定兼容，但在多细胞层系统（如 3D、Matrigel® 或类器官培养）中具有挑战性。由于染料具有反应性，因此大部分染色将仅限于外部/暴露的细胞层。更长的孵育时间让染料更深入地渗透到细胞层通常不会有帮助，因为标记反应是短暂的（15-30 分钟）。

请参阅我们对适用于3D 培养物或类器官的染料的建议。

对于可固定的核死细胞染色剂，可以考虑的其他选择是NucSpot® Far-Red。该染料旨在作为更常见的死细胞染料 7-AAD 的改进替代品，在一定程度上是可固定的。虽然通常更适合流式细胞术，因为它的光谱特性不适合标准荧光显微镜，但使用共聚焦成像可能更好，因为 Ex/Em 可以更适当地匹配。我们还建议在固定后立即成像，不要在固定后长时间储存样本，因为染色会随着时间的推移而恶化。

活力染料PMA可能是另一种可能。PMA 是碘化丙锭 (PI) 的光反应版本，通常用于细菌的活力 PCR。但是，它可用于哺乳动物细胞（根据内部客户反馈）作为流式细胞仪的可固定死细胞染色剂。PMA 在与 DNA 结合之前不会发出荧光。随后暴露在强光下会激活染料并使其与 DNA 原交联，使其可固定。染料与细胞的孵育需要在黑暗中进行，并且在暴露于光下进行光交联之前将多余的染料洗掉。可能需要优化曝光源（可以使用 LED 灯来避免热量）和光强度（亮度足以使染料交联而不会发生光漂白；通常需要靠近明亮的 LED 或卤素灯，室内光线不足） .